近年來(lái)，m6A RNA甲基化作為國(guó)家自然科學(xué)基金表觀遺傳學(xué)研究的熱門(mén)領(lǐng)域，相關(guān)研究成果層出不窮，高分文章不斷。研究方向包括疾病發(fā)生發(fā)展、發(fā)育和分化、環(huán)境暴露與響應(yīng)等。

研究人員為m6A甲基化課題申請(qǐng)作準(zhǔn)備以及為降低m6A甲基化實(shí)驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)，通常會(huì)進(jìn)行m6A甲基化研究的前期探索性實(shí)驗(yàn)，主要包括：

l   檢測(cè)m6A writers、readers、erasers的表達(dá)

l   檢測(cè)整體m6A甲基化水平變化

l   m6A writers、readers、erasers基因干擾/敲除/過(guò)表達(dá)

l   其他前期實(shí)驗(yàn)

 

一、檢測(cè)m6A writers、readers、erasers的表達(dá)

方法包括：

2  RT-qPCR檢測(cè)其mRNA表達(dá)

2  Western blot檢測(cè)蛋白質(zhì)翻譯

e.g. 小鼠腦損傷前后觀察到METTL14和FTO的RNA表達(dá)顯著變化

 

二、檢測(cè)整體m6A甲基化水平變化

方法包括：

2  m6A甲基化免疫熒光染色（定性）

2  m6A斑點(diǎn)雜交（定性）

2  質(zhì)譜法（定量）

2  比色法（定量）

三、m6A writers、readers、erasers基因干擾/敲除/過(guò)表達(dá)

方法包括：

2  檢測(cè)處理后潛在m6A修飾基因的蛋白表達(dá)

2  檢測(cè)處理后所研究的表型和功能變化

白質(zhì)翻譯水平下調(diào)，METTL3/14過(guò)表達(dá)又造成相關(guān)基因蛋白質(zhì)水平上調(diào)。

 

四、其他前期實(shí)驗(yàn)

在沒(méi)有條件開(kāi)展甲基化相關(guān)前期實(shí)驗(yàn)的情況下，也可以開(kāi)展其他預(yù)實(shí)驗(yàn)。如：

2  關(guān)鍵表型指標(biāo)測(cè)定

2  轉(zhuǎn)錄組（成本低廉）—— 基于m6A可調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄本的成熟、降解、穩(wěn)定性

 

在進(jìn)行前期探索性預(yù)實(shí)驗(yàn)后，m6A RNA甲基化的研究思路與項(xiàng)目設(shè)計(jì)還包括：技術(shù)選擇、數(shù)據(jù)挖掘、下游驗(yàn)證。