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ac4C乙?;疪NA免疫沉淀測(cè)序(acRIP-seq)

ac4C RNA乙?;∟4-acetyicytidine,ac4C),N4位乙酰胞嘧啶,是真核原核生物中保守的化學(xué)修飾,早期研究認(rèn)為ac4C主要存在于tRNA和18S rRNA上。近期研究顯示,mRNA上也存在大量的ac4C,該修飾在促進(jìn)蛋白翻譯、影響RNA穩(wěn)定性和可變剪接、調(diào)控基因表達(dá)發(fā)揮重要作用,是繼m6A修飾之后表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)的新興發(fā)展方向。


ac4C RNA修飾的檢測(cè),易基因采用基于抗體富集的ac4C RNA乙?;庖吖渤恋?(acetylated RNA Immunoprecipitation,acRIP)技術(shù):基于抗體特異性結(jié)合乙?;揎棄A基原理,以RNA免疫共沉淀富集乙?;揎椘螢榛A(chǔ),然后通過高通量測(cè)序(acRIP-seq),在轉(zhuǎn)錄組范圍內(nèi)研究發(fā)生乙?;腞NA區(qū)域,高效獲得結(jié)果。


易基因提供適用于不同科研需求的acRIP -seq技術(shù):

1)ac4C 乙?;?常量mRNA acRIP -seq

2)ac4C 乙?;?常量mRNA +lncRNA acRIP -seq

3)ac4C 乙酰化-微量mRNA +lncRNA acRIP -seq



實(shí)驗(yàn)原理:

首先通過poly(A)捕獲RNA,將獲得的RNA打成100nt左右的小片段;之后使用ac4C特異性抗體進(jìn)行免疫共沉淀,含有ac4C修飾的RNA片段被富集并回收;進(jìn)而對(duì)回收的RNA進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建、高通量測(cè)序和生物信息學(xué)分析,通過peak分析鑒定出ac4C修飾的位點(diǎn)。


實(shí)驗(yàn)策略:


信息分析:


送樣要求:


研究案例:

mRNA中胞嘧啶核苷乙?;商岣叻g效率

Acetylation of Cytidine in mRNA Promotes Translation Efficiency

期刊:Cell      

IF:45.5

N4-乙酰胞嘧啶(ac4C)是一種由乙酰轉(zhuǎn)移酶NAT10催化的mRNA修飾。本研究通過對(duì)WT和下調(diào)NAT10的Hela細(xì)胞進(jìn)行acRIP-seq和mRNA-seq,揭示了ac4C在編碼序列中的特異性乙?;瘏^(qū)域富集。NAT10敲除導(dǎo)致在比對(duì)mRNA位點(diǎn)的ac4C檢測(cè)減少,并與靶向mRNA整體下調(diào)相關(guān)。對(duì)mRNA半衰期分析顯示,乙?;痬RNA穩(wěn)定性依賴于NAT10。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)表明,mRNA乙?;隗w內(nèi)外增強(qiáng)底物翻譯。在ac4C peaks的密碼子含量分析揭示了在動(dòng)態(tài)位點(diǎn)中胞嘧啶的偏倚表達(dá),從而影響mRNA解碼效率。這些發(fā)現(xiàn)擴(kuò)展了mRNA修飾范圍(包括乙?;瘹埢㈥U明了ac4C在mRNA翻譯調(diào)控中的作用。

acRIP-seq繪制mRNA ac4C圖譜


參考文獻(xiàn):

Arango D, et al. Immunoprecipitation and Sequencing of Acetylated RNA. Bio Protoc. 2019 Jun 20;9(12):e3278. pii: e3278. doi: 10.21769/BioProtoc.3278. PubMed PMID: 33654795.Arango D, et al. Acetylation of Cytidine in mRNA Promotes Translation Efficiency. Cell. 2018 Dec 13;175(7):1872-1886.e24. pii: S0092-8674(18)31383-7. doi: 10.1016/j.cell.2018.10.030. PubMed PMID: 30449621.


以上就是關(guān)于ac4C乙酰化RNA免疫沉淀測(cè)序(acRIP-seq)技術(shù)的介紹,易基因科技提供全面的表觀遺傳學(xué)研究整體解決方案,有需要的老師可以通過以下方式聯(lián)系我們。

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